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全波長酶標儀的原理與應用
  • 發布日期:2016-12-22      瀏覽次數:4445
    • 全波長酶標儀的原理與應用

      酶標儀(Microplate Reader)是對酶聯免疫檢測(EIA)實驗結果進行讀取和分析的專業儀器。酶聯免疫反應是通過偶聯在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的,反應結果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。酶標儀實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同。

      一、酶標儀的工作原理

          使抗原抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原抗體與某種連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,zui后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。

      光源燈發出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號.電信號經前置放大,對數放大,模數轉換等信號處理后送入微處理器進行數據處理和計算,zui后由顯示器和打印機顯示結果. 微處理機還通過控制電路控制機械驅動機構X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現自動進樣檢測過程.而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測,因此省去了X,Y方向的機械驅動機構和控制電路,從而使儀器更小巧,結構也更簡單.

      微孔板是一種經事先包理于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內都包埋著相應的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.

      光是電磁波,波長100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光,但對綠色不吸收,反射出來,所以植物呈現為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。

      隨著檢測方式的發展,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發光(Lum)。

      酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內的任意波長,而濾光片型酶標儀則根據選配的濾光片,只能截取特定波長進行檢測。

      二、酶標儀的應用

           酶標儀廣泛地應用在臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯免疫檢測試劑盒的應 用,使得酶標儀在繁殖保健領域中應用越來越廣泛,同時促進了繁殖健康技術水平提高。目前在國內血站臨床試驗室中酶標儀成為ELISA測定的重要工具。在農業中利用酶標儀研究酚氧化酶,為開發以該酶為靶標的新型害蟲控制劑提供理論依據。伏馬菌素是zui近發現的一族主要由幾種真菌產生的結構相關的毒素代謝產物,該毒素已被世界衛生組織列為近年來首先進行研究的幾種霉菌毒素之一。因此快速、的檢測伏馬菌素便顯得尤為重要。在450nm或630nm的濾鏡下使用酶標儀對微孔板進行光學測量,可以檢測伏馬菌素的含量,在食品安全方面有著重要的應用。生長曲線一般指菌落總數CFU/mI?;蛘呔淇倲档膶祃og CFU/ml。隨時間變化曲線,可用來展示微生物生長情況和新陳代謝規律。目前通過分光光度計測定菌懸液時存在即時性差、操作繁瑣、易污染等缺點,由于酶標儀是一種快速、準確、高通量的儀器,所以我們總會選擇使用酶標儀來進行菌懸液OD值的測定,來提高工作效率,節約時間。


       

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